酶聯免疫試劑盒的底物A就是顯色劑A（含過氧化氫）為供氫體（DH2）,底物B就是顯色劑B（含TMB）,用于顯色。
另外，常用的底物還有：
1）AP的底物，常用的為對-硝基苯磷酸脂（PNP），其反應物為的對硝基酚，測讀波長為405nm2）GOD的底物，為葡萄糖，供氫體為對硝基藍四氮唑，反應產物為不溶性的藍色沉淀 什么是TMB？TMB即四甲基聯苯胺（3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine）是一種脂溶性較強的基團，因此容易進入細胞與細胞器中的HRP反應，且由于這種高度的脂溶性，使其易形成多聚體，在HRP活性部位產生粗大的、深蘭色沉淀物，這使得TMB成為組化實驗中的一種很好的發色團。同時反應產物的沉淀，使得HRP的活性部位更加暴露，利于酶氧化反應進行。
酶聯免疫試劑盒TMB的反應產物為深藍色，利于光鏡觀察，且反應產物越聚越大，常超出單個細胞器的范圍（而DAB則被限制在其內），故TMB反應的檢測閾較低。
由于上述優點，目前TMB常用于光鏡及超微結構水平的HRP及HRP-WGA神經投射的研究。
需要注意的是：TMB顯色液中的A液和B液應在2h內新鮮配制。另外，TMB是一種較強的皮膚刺激劑，并有致癌的潛在可能，故使用時應帶手套及在通風條件下操作。
TMB經HRP作用后共產物顯藍色，目視對比鮮明。TMB性質較穩定，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成應用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有無致癌性等優點，因此在ELISA中應用日趨廣泛。酶反應用HCL或H2SO4終止后，TMB產物由藍色呈，可在比色計中定量，zui適吸收波長為405nm。
ABTS雖不如OPD和TMB敏感，但空白值極低，也為一些酶聯免疫試劑盒所采用。
